Gotham Knights ขาดวายร้ายจำนวนมาก แต่สามารถแก้ไขได้ด้วย DLC หลังการเปิดตัว ซึ่งผู้ร้ายรายใหม่มาถึงและมีไฟล์คดีของตัวเอง
เมื่อเครดิตเข้าสู่Gotham Knightsผู้เล่นจะได้เห็นศัตรูและผู้บังคับบัญชาทั้งหมดที่เกมนำเสนอไม่มากก็น้อย กลุ่มศัตรู ได้แก่ GCDP, Court of Owls, Mob, Regulators และ Freaks และGotham Knightsในทางเทคนิคแล้วมีเพียงสองวายร้ายหลักในการเล่าเรื่อง: Jacob Kane ของ Court of Owlsและ Talia al Ghul League of Shadows มีแก๊งค์เป็นของตัวเองและนั่นก็เป็นเรื่องที่น่ายินดี แม้ว่ามันจะประกอบด้วยแค่นักฆ่าและนักฆ่าจรวด ที่เพิ่ม Man-Bats เข้าไปด้วย
ตัวร้ายอีกสามคนที่ผู้เล่นแบทแมนต้องเผชิญคือ Harley Quinn, Mr. Freeze และ Clayface เหล่าวายร้ายเหล่านี้ถูกไล่ล่าเฉพาะในภารกิจแฟ้มคดีส่วนบุคคล ซึ่งมีความยาวแตกต่างกันไปและความพึงพอใจในการต่อสู้กับบอส แฟน ๆ หลายคนผิดหวังอย่างเห็นได้ชัดจาก การที่ Gotham Knightsขาดคนร้ายแต่ก็ยังเป็นเรื่องดีที่จะได้เห็นการปรากฏตัวมากขึ้นหลังการเปิดตัวหาก WB Games Montreal มี DLCs ที่วางแผนไว้ ถ้าเป็นเช่นนั้น มีผู้สมัครสำคัญจำนวนหนึ่งสำหรับวายร้ายที่สามารถเสนอภารกิจแฟ้มคดีที่น่าเหลือเชื่อในGotham Knights
เบน
โดยธรรมชาติแล้วBane จะเป็นวายร้ายที่สมบูรณ์แบบสำหรับการต่อสู้แอ็คชั่นสวมบทบาทของ Gotham Knights โดยพื้นฐานแล้ว Bane นั้นเหมือนกับศัตรูดุร้ายขนาดมหึมา ของ Gotham Knights ที่มีการโจมตีที่รุนแรง และการโจมตีของเขาสามารถเลียนแบบได้ มันสมเหตุสมผลกับ Bane เช่นกัน เนื่องจากสไตล์การต่อสู้ของเขานั้นเป็นสไตล์ของนักต่อสู้รุ่นเฮฟวี่เวท
Gotham Knightsยอมจำนนต่อศัตรูตัวใหญ่กว่าที่ Bat Family อาจไม่สามารถกำจัดได้อย่างง่ายดาย ซึ่งเป็นสาเหตุที่ Harley Quinn อาจเป็นทางเลือกที่แปลกสำหรับเจ้านาย เธอไม่ได้มีพลังพิเศษ และไม่มีความเชี่ยวชาญด้านศิลปะการต่อสู้หรืออุปกรณ์ที่ตระกูล Bat มี ทำให้เธอดูแย่อยู่แล้วโดยพื้นฐานแล้วจากมุมมองของการต่อสู้ระดับหัวหน้า ในทางตรงกันข้าม Bane เป็นตัวละครที่เก่งกาจที่สุด และจะเข้ากันได้ดีกับมินิบอสรุ่นเฮฟวี่เวทที่เหลือของเกม ถ้าGotham Knightsกำลังวางแผนแฟ้มคดีง่ายๆ ที่มีเนื้อหาเดียวกันมากกว่านี้ Bane น่าจะเป็นตัวเลือกที่ดีที่สุด
Poison Ivy
Poison Ivy จะเป็นวายร้ายที่สมบูรณ์แบบในGotham Knights สำหรับผลกระทบด้านสิ่งแวดล้อมและองค์ประกอบของเธอ Storm Engine ของ Mr. Freeze ห่อหุ้มอาคารทั้งหลังไว้ในน้ำแข็ง ในขณะที่สารคล้ายปรอทของ Clayface สามารถกระโดดและจมลงใต้น้ำผ่านถนนใน Gotham City ฟลอราที่เคลื่อนไหวได้ของ Poison Ivy อาจมีพฤติกรรมคล้ายกัน โดยใช้ลำต้นที่มีหนามขนาดมหึมาเพื่อไล่ตามผู้เล่นขณะที่พวกเขาแข่งกันออกไปบน Batcycle หรือล้อมอาคารทั้งหลัง นอกจากนี้ Poison Ivy อาจมีฝ่ายสมุนที่มึนเมาโดยฟีโรโมนของ Ivy เพื่อทำตามคำสั่งของเธอ
ศัตรูเหล่านี้และตัว Ivy สามารถสร้างความเสียหายจากธาตุยาพิษได้ ซึ่งจะทำให้ผู้เล่นต้องใช้อุปกรณ์ระดับตำนานที่มีความต้านทานที่เหมาะสม ดังนั้น Ivy อาจมีความสำคัญต่อGotham Knightsทั้งในแง่ของการแสดงและสิ่งที่เธอสามารถเพิ่มให้กับเอฟเฟกต์องค์ประกอบในการเล่นเกม
